Γρήγορη εξάρτηση ανίχνευσης αντιγόνων ολόκληρου αίματος, εξάρτηση εγχώριας δοκιμής αντιγόνων 150-250ul

Με το ιατρικό όργανο IVD για να κάνει SAR-CoV-2 εξουδετερώνοντας εξάρτηση δοκιμής αντισωμάτων γρήγορη

Εξουδετερώνοντας εξάρτηση δοκιμής Fluerescent αντισωμάτων & εξουδετερώνοντας γρήγορη δοκιμή αντισωμάτων

Η pseudovirus-εξουδετερώνοντας δοκιμή αντισωμάτων εκτελέσθηκε ως προηγουμένως περιγεγραμμένο (5). Εν συντομία, τα κύτταρα Vero σπάρθηκαν στα πιάτα του 96 καλά για να παραγάγουν monolayer κατά την διάρκεια της μόλυνσης. Τα ποσά Pretitrated rVSV-SAR-Cov-2 [η ακίδα phCMV3-SAR-CoV-2 SAR-CoV-2-vsv-δg-GFP (πράσινη φθορισμού πρωτεΐνη) παρήχθη με τα κύτταρα HEK293T, ATCC crl-3216] επωάστηκαν με το σειριακά αραιωμένο ανθρώπινο πλάσμα σε 37°C για 1 ώρα πριν από να προσθέσουν συμβάλλοντα monolayers κυττάρων Vero (ATCC ccl-81) στα πιάτα του 96 καλά. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 12 έως 16 ώρες σε 37°C στο κοβάλτιο 5%2.Τα κύτταρα καθορίστηκαν έπειτα paraformaldehyde 4%, που λεκίασαν με 1 μg/ml $*Χοεθχστ, και imaged χρησιμοποιώντας imager CellInsight CX5 για να ποσολογήσουν το συνολικό αριθμό των κυττάρων που εκφράζουν GFP. Η μόλυνση ομαλοποιήθηκε στο μέσο αριθμό κυττάρων που μολύνθηκαν rVSV-SAR-CoV-2 που επωάστηκαν με με το κανονικό ανθρώπινο πλάσμα. Το LOD καθιερώθηκε όπως <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50(μεσαία ανασταλτική συγκέντρωση) οι τίτλοι υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την κατάλληλη LogIC50 οπισθοδρόμηση ένας-περιοχών στο πρίσμα 8,0 GraphPad.

Μια ψηλά φθορισμός-βασισμένη δοκιμή ουδετεροποίησης

Για να συμπληρώσουμε το χάσμα για serodiagnosis covid-19 και την αξιολόγηση εμβολίων, αναπτύξαμε μια φθορισμός-βασισμένη δοκιμή που γρήγορα και σοβαρά μετρά την ουδετεροποίηση ενός δημοσιογράφου SAR-CoV-2 από τα αντισώματα από τα υπομονετικά δείγματα. Η δοκιμή στηρίχτηκε σε έναν σταύλο (mNG) SAR-CoV-2 όπου το γονίδιο mNG κατασκευάστηκε στο ORF7 του προερχόμενου από ιό γονιδιώματος (Σχ. 1a)10. Η πλήρης ακολουθία mNG SAR-CoV-2 περιγράφεται σε συμπληρωματικό Σχ. 1. Το σχήμα 1b απεικονίζει το διάγραμμα ροής της δοκιμής ουδετεροποίησης δημοσιογράφων 96 καλά σχηματοποιεί. Το πρωτόκολλο δοκιμής είναι λεπτομερές στις συμπληρωματικές μεθόδους. Εν συντομία, οι υπομονετικοί οροί ήταν σειριακά αραιωμένοι και επωασμένοι με τον ιό δημοσιογράφων. Μετά από την επώαση σε 37°C για 1   χ, Vero CC-81 κύτταρα (προ-που σπέρνονται σε ένα καλά πιάτο 96) μολύνθηκε με τα μίγματα ιών/ορών σε μια πολλαπλότητα της μόλυνσης (MOI) 0,5. Στην μετα-μόλυνση 16   χ, τα mNG-θετικά κύτταρα ποσολογήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν υψηλός-ικανοποιημένο αναγνώστη απεικόνισης (Σχ. 1b). Πρέπει να σημειωθεί ότι Vero CC-81 κύτταρα, όχι κύτταρα Vero E6, επιλέχτηκε για τη δοκιμή mNG για να επιτρέψει τον ακριβή προσδιορισμό της ποσότητας των φθορισμού κυττάρων. Εξήντα covid-19 δείγματα ορών από RT-PCR-επιβεβαιωμένους ασθενείς και 60 μη-COVID-19 δείγματα ορών (που αρχειοθετούνται πριν από την εμφάνιση covid-19) αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τον ιό δημοσιογράφων. Για μερικά COVID-19-θετικά δείγματα, το μεταιικό θετικό rt-pcr ημερών συλλογής δειγμάτων ήταν διαθέσιμο και είναι υποδειγμένο στον πίνακα Table1.1. Μετά απότηνπροερχόμενη από ιόμόλυνσηδημοσιογράφων, τακύτταραπου γίνονταιπράσιναελλείψειτουορού(Σχ. 1c, κατώτατη επιτροπή) αντίθετα, η επώαση του ιού δημοσιογράφων με τον υπομονετικό ορό covid-19 μείωσε τον αριθμό φθορισμού κυττάρων (τοπ επιτροπή). Μια καμπύλη δόσης-αντίδρασης λήφθηκε μεταξύ του αριθμού φθορισμού κυττάρων και των πτυχών της διάλυσης ορών (Σχ. 1d και συμπληρωματικός Σχ. 2), το οποίο επέτρεψε τον προσδιορισμό των πτυχών διαλύσεων εκείνο το εξουδετερωμένο 50% των φθορισμού κυττάρων (NT50). Η δοκιμή δημοσιογράφων εντόπισε γρήγορα 120 δείγματα μέσα σε 24   χ: και οι 60 covid-19 οροί (δείγματα 1-60) παρουσίασαν θετικό NT50από 35 έως 5711, και τους 60 μη-COVID-19 ορούς (δείγματα 61-120) παρουσίασε αρνητικό NT50 <20> 1).

Παράμετρος: